Universitas Surabaya (2020) Analisa Putatif Tanaman Transforman – Metodologi Kloning SoSUT1 Pada Tebu. EC00202048601.
Preview |
PDF
sertifikat_EC00202048601_Johan_Metodologi kloning SoSUT1 pada tebu.pdf Download (765kB) | Preview |
Abstract
Video ini menjelaskan tentang proses melakukan transformasi dan overekspresi kloning SoSUT1 pada tebu. Latar belakang dilakukan transformasi genetik SoSUT1 pada tebu adalah overekspresi SoSPS1 mampu meningkatkan sintesis sukrosa dalam daun tebu, namun tidak dapat mengimbangi overekspresi pada batang tebu. Secara umum proses yang terjadi adalah glukosa hasil fotosintesis disimpan dalam bentuk sukrosa, kemudian dibawa sepanjang sel-sel tanaman (dari source ke sink) dengan bantuan transporter khusus untuk mentransport sukrosa (SUT). Peningkatan protein SUT dapat dimanfaatkan untuk meningkatkan pertumbuhan tanaman dan kadar sukrosa pada organ penyimpanan (tebu lebih manis). Ekspresi dari SoSUT1 dapat dideteksi dan dicek pada tingkat transkripsi dan translasi dengan teknik PCR, bantuan reverse transcriptase, dan western blot. Keberadaan SoSUT1 dapat dimanfaatkan untuk membuat protein rekombinan yang mirip antigen untuk membentuk antibodi poliklonal SUT1yang digunakan untuk analisis western blot. Analisis PCR menggunakan plasmid pAct yang ditambahkan promotor X dengan selectable marker yang memiliki resistensi terhadap kanamisin dan ditambahkan sisi pengenalan enzim restriksi (hptII) yang digunakan untuk memasukkan SoSUT1 ke dalam plasmid. Analisis RT-PCR untuk mengecek dari cDNA dengan menggunakan primer yang sesuai dengan cDNA SUT1. Analisis western blot dilakukan dengan mengisolasi protein dan dipisahkan menggunakan SDS-PAGE, lalu diblotting menggunakan western blot (antibodi yang digunakan: antibodi poliklonal SUT1). Analisis kadar sukrosa dilakukan dengan HPLC. Efektivitas dari transformasi genetik pada tanaman secara tak langsung dipengaruhi oleh jenis eksplan, yang digunakan adalah tunas in vitro (regenerasi cepat, tapi belum tentu semua sel berhasil ditransformasi) atau kalus (variasi somaklonal tinggi, tapi regenerasi lambat).
Item Type: | Patent |
---|---|
Subjects: | L Education > L Education (General) S Agriculture > S Agriculture (General) S Agriculture > SB Plant culture |
Divisions: | Faculty of Technobiology > Department of Biology |
Depositing User: | JOHAN SUKWEENADHI |
Date Deposited: | 04 Jan 2021 08:59 |
Last Modified: | 24 Mar 2021 16:31 |
URI: | http://repository.ubaya.ac.id/id/eprint/38699 |
Actions (login required)
![]() |
View Item |